грибница.
V. Большие куски грибницы переносятся на субстрат культуры из семян ржи и
разрастаются.
VI. Культура накрывается землей, в грибнице появляются узелки, из которых
развиваются грибы
VII. Сбор урожая.
I. ПОЛУЧЕИЕ СПОР С ПОМОЩЬЮ ОТПЕЧАТКА
1. Отделить шляпку от ножки (ножом, скальпелем или безопасной
бритвой).
2. Шляпку положить спороносным слоем вниз на лист блестящнй, белой
бумаги или стеклышко.
3. Для защиты от смазывания и воздушного потока закрыть стаканом или
чашкой Петри.
4. Оставить на 24 часа.
5. Осторожно снять стакан и шляпку.
6. Hа подкладке виден отпечаток спор пурпурно - коричневого или
черно - коричневого цвета. Споры упали со спороносного слоя и
показали на бумаге звездообразное расположение спороносного слоя.
II. ПРОРАСТАНИЕ СПОР
Чтобы могла возникнуть плодовитая (дикариотная) грибница, зародышевые
грибницы должны встретиться и объединиться с двумя различными спорами.
Используемые споры могут происходить от одной и той же шляпки.
1. Простерилизовать чашку Петри гаровой питательной средой (см.
"Стерилизация чашек Петри", стр. 39).
2. Снять споровую палочку инокуляционной петлей. Для этого надо
коснуться петлей отпечатка спор.
3. Слегка приподнять крышку чашки Петри и коснуться петлей, к
которой прилипли тысячи спор, трех - четырех мест.
4. Снова сразу закрыть крышку.
5. Hа точках инокуляции прорастают споры.
6. Развиваются различные монокариотные (= только одно клеточное ядро
в каждой клетке) зародышевые грибницы, которые через 3 - 4 дня
видны в виде белого пушка, который растет с мест прививки во все
направления (= радиально).
7. Зародышевые грибницы двух инокуляционных точек встречаются,
соприкасающиеся клетки обеих участвующих монокариотных грибниц
соединяются в новую дикариотную клетку с двумя клеточными ядрами
- мать неограниченно размножающейся и плодородной грибницы.
Оплодотворение произошло.
III. ИЗОЛИРОВАНИЕ ЧИСТОГО ГРИБНОГО ШТАММА
Для разведения необходима только одна продуктивная, абсолютно чистая,
дикариотная грибница.
1. Слегка приподнять крышку чашки с зародышами.
2. Скальпелем или (лучше) согнутой в крючок инокуляционной петлей
удалить по возможности маленький кусочек грибницы (идеальный
случай: отдельную нить грибницы). Чем меньше, тем чище.
3. Приподнять крышку чистой чашки Петри и положить нить грибницы на
стерильную гаровую среду (только в одной точке).
4. Сразу закрыть крышку.
5. Через 8 - 12 дней при комнатной температуре изолированная
грибница почти полностью покрыла поверхность субстрата.
6. Другие изоляционные работы, чтобы обеспечить чистоту грибницы:
Если вы не совсем уверены, что видимая в чашке грибница - один -
единственный штамм, можно использовать еще раз описанные в п.III.
методы. Т.е.: изолировать отдельные нити предположительно чистой
грибницы и положить на свежую пластинку. Через 8 - 12 дней должна
развиться точно чистая грибница.
IV. ИЗГОТОВЛЕНИЕ БОЛЬШИХ ОБЪЕМОВ ГРИБНИЦЫ (запасы грибницы)
Чтобы можно было привить грибницу во много стаканов, полных субстрата
ржи, изолированный, чистый штамм грибницы должен размножиться в
большем масштабе.
1. Выбрать лучшую чистую грибницу: сильный рост, без чужих зародышей
(контаминанты), не старше 10 дней.
2. Выбранную грибницу перенести на несколько свежих чашек Петри
(поднять крышку, скальпелем или согнутой инокуляционной петлей
снять кусочек грибницы, положить его в чашку и быстро закрыть ее.
Инструмент снова простерилизовать и из чашки с выбранной
грибницей снять другую пробу, которую перенести на другую свежую
чашку и т.д.).
3. Оставить на 3 - 5 дней при комнатной температуре. Грибница должна
развиться известным способом (равномерно во все стороны -
радиально) из точки инокуляции. Видна самое позднее через 4дня.
4. Через 7 - 20 дней вся поверхность питательной среды покрыта
грибницей.
V. ГРИБНИЦА НА РЖИ
1. Hаполнить субстратом ржи небольшую стеклянную банку для домашнего
консервирования (или другой стеклянный сосуд с крышкой):
Количества для 0,5 л банки : 120 г (полчашки) целых зерен ржи (не
посевную рожь, она может быть обработана фунгицидами) 2 г (1/2
чайной ложки) извести (СаСО3), напр., ракушечный известняк или
кормовоую известь 0,2 г фосфата калия (К2РО4) (можно и не
добавлять) 180 мл воды (почти полный стакан 0,2 л) водопроводной
(хлор) или дистилированной (лучше) Банка 1 л : 225 г ржи, 275 мл
воды, 4 г извести
2. Простерилизовать в кастрюле с давлением пара. а) наполнить
кастрюлю на 2 см водой б) поставить туда банку (не подкладывать
резину и не завинчивать крышку, консервировать не на до) в)
довести воду до кипения с открытым вентилем г) закрыть вентиль,
когда вода кипит д) варить на слабом огне 60 мин е) остудить ж)
снять крышку и вынуть банку.
3. Разрезать полностью развившуюся чистую культуру грибницы
стерильным ножом или скальпелем на кусочки по 1 - 2 кв. см.
4. Кусочки грибницы брать по отдельности пинцетом и каждый класть в
отдельную банку с субстратом ржи.
5. Потрясти, чтобы кусочки грибницы и отдельные оторванные от нее
грибные нити (= Hyphen) попали во внутрь субстрата.
6. Культуры хранить при очень высокой относительной влажночсти
воздуха 95% и температуре 30 градусов в темном месте.
7. Банки хранить в больших стиропоровых ящиках (можно получить у
торговцев декоративными рыбками или как упаковочный мусор в
больших магазинах). При обмене веществ грибницы освобождается
тепло (как тепло нашего тела), которое сохраняется этим
изолированным сосудом. Поэтому не нужно постороннее отопление. В
крышке ящика надо сделать отверстие, которе потом заклеивается
толстой пластиковой фольгой. Через это окошко можно наблюдать
развитие внутри ящика.
8. Через 3 - 4 дня виден рост грибницы на одном или нескольких
местах.
9. Через 4 дня, по меньшей мере на одном месте, должно быть видно
вздутие грибницы диаметром 2 - 3 см, весь субстрат в банке надо
сильно потрясти. Благодаря этому новообразованная грибница рвется
на много мелких грибных нитей, которые - каждая для себя - снова
представляет основу для роста грибницы.
10. Оставить банки еще на 3 - 4 дня, грибница образуется на некоторых
местах.
11. Если через 6 - 8 дней не наблюдается достаточный рост грибницы,
банку надо потрясти еще раз.
12. Через 8 - 14 дней субстрат ржи должен полность покрыться
грибницей. екотрые культуры достигают эту стадию уже через 6
дней, другим надо три недели и больше. Это зависит не только от
силы роста грибницы (надо выбирать всегда быстрорастущие грибницы
для размножения), но и от тепла, влажности и давления воздуха.
VI. ЗАКРЫВАНИЕ
Если банки полностью обросли грибницей, поверхность культуры
покрывается на 1 - 2 см землей, чтобы гриб начал плодоносить.
1. Землю (компост, землю с кротовых холмиков, цветочную землю или с
подстилки для кошки) простерилизовать в печи (20 мин. при 200
град.С) или в кастрюле (30 мин.).
2. Покрыть культуры землей на 1 - 2 см (= полчашки ).
3. Землю хорошо увлажнить, на ощупь она должна быть как выжатая
губка. Годятся распылители воды а для поливкм цветов.
4. Культуры оставить в стиропоровых ящиках.
5. Банки ежедневно поливать 2 - 3 сильными струями воды.
6. В течение 2 - 3 недель грибница прорастает на земляном покрытии,
на поверхности показывается пушок.
7. Узелкообразные сросшиеся части грибницы часто видно прямо под
поверхностью. Из этих узелков диаметром 1 - 2 мм развиваются в
течение 5 - 10 дней грибы с диаметром шляпки 3 - 10 см.
8. В этой стадии грибы можно ежедневно по 10 часов облучать неоновой
лампой, это необходимо для роста. Культуры не должны находиться
долгое время на солнечном свете, т.к. ультрафиолетовое излучение
вредит им.
VII. СБОР УРОЖАЯ
1. Сначала собирают маленькие или слишком плотно выросшие грибы.
Слишком плотное расположение в узкой банке ведет к тому, что
грибы перезревают и портятся.
2. Иногда грибы из узелков грибницы растут вниз. Против этого
покрыть люминиевой фольгой нижнюю часть банки. Или осторожно
разбить банку и блок грибницы положить таким образом, чтобы и эти
грибы могли развиваться. Держать сырой.
КУЛЬТУРА В ПРОБИРКЕ И КАПЕЛЬНАЯ ИОКУЛЯЦИЯ
Здесь - другой метод культуры, с помощью которой достигается более высокая
стерилизация:
1. Отпечаток спор на стерильной полоске стекла (опустить стекло в спирт,
потом держать на открытом огне).
2. Споры соскоблить в 10 мл стерильной воды.
3. Потрясти пробирку. При необходимости разбавить 100 г стерильной воды.
4. Hаполнить шприц водой со спорами.
5. Привить чашку для зародышей спорами, по 1 капле в каждую
инокуляционную точку.
6. Изолировоть плодородные (дикариотные) нити грибницы и положить в
пробирку, которая лежит наискосок и содержит гаровую питательную
среду.
7. Чистую грибницу в пробирке не разрезать(все равно не получится),
пропитать стерильной водой.
8. Hабрать шприц.
9. Эту жидкость ввести в субстрат ржи, 1 мл (= 30 капель) в каждую банку.
РАБОЧИЕ МАТЕРИАЛЫ
* Чашки Петри: стеклянные чашки высотой 2 см и диаметром 6 - 12 см с
крышкой чуть больших размеров.
* Инокуляционная петля: проволока, покрытая платиной и согнутая в петлю,
которя вставлена в ручку (или в пробку).
* Агар: белый порошок, который смешивается с водой и кипятится. При
охлаждении он становится желеобразной, более или менее плотной
полупрозрачной массой. Как питательная основа для микробовых культур.
Добывается из морских водорослей.
* Спиртовка: небольшая емкость для спирта, из которой выходит фитиль.
Спиртовка горит без копоти. Для тушения огня - крышка.
* Дезинфецирующее средство: эрозоль или жидкость. С остающимся действием
или улетучивающаяся.
Все материалы можно получить в медпунктах, в магазинах по продаже
лабораторного оборудования и во многих аптеках.
АГАРОВАЯ ПИТАТЕЛЬАЯ СРЕДА
Чтобы предоставить грибнице подходящую питательную среду, используют
следующие смеси:
1. В один литр кипящей воды добавить следующую смесь: (сначала взвесить и
перемешать ингридиенты): - 20 г солодового сахара (порошок или сироп)
- 20 г агара - 0,1 г кальция (СаСО3) - ракушечник, кормовой кальций -
0,1 г фосфата калия (К2РО4)
2. Эта питательная среда для культуры грибов лучше всего показала себя: -
250 г неочищенного картофеля мелко порезать, быстро промыть под
холодной водопроводной водой, 30 мин. кипятить в 1 л воды на слабом
огне. Процедить отвар через полотенце, картофельные остатки выбросить.
- 15 г гара - 10 г декстрозы - 1,5 г пищевых дрожжей или дрожжевого
экстрата смешать и добавить в процеженный отвар.
Состав питательной среды является решающим для развития грибницы и гриба.
Высокое содержание питательного вещества ведет к сильному росту грибницы,
но к уменьшению плодородия. а средах, бедных питательными веществами,
